HHV-8陽性的原發滲出性淋巴瘤

hhv-8陽性的原發滲出性淋巴瘤

臨床血液學雜誌 1999年第4期第12卷 進修苑

作者：吳裕丹　陳燕

單位：同濟醫科大學附屬協和醫院血液病研究所　郵政編碼：武漢，430022

關鍵詞：淋巴瘤，原發滲出性；人類免疫缺陷病毒

　　原發滲出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma,pel)也稱漿膜腔隙型淋巴瘤(body cavity-based lymphoma)，作為非霍奇金淋巴瘤一種新的型別，正逐漸被人們所認識。knowles於1989年首次報道此病。它主要見於人類免疫缺陷病毒(hiv)血清學陽性的艾滋病患者。無1例外地生長於漿膜腔(如胸腔、腹腔及心包腔)。臨床表現為嚴重的漿膜腔積液及淋巴瘤細胞滲出。整個病程通常缺乏明顯的淋巴瘤腫塊或淋巴結腺病的證據。對全身化療效果不佳，預後極差。大多數患者同時屬艾滋病晚期，平均生存期2～6個月。本病最獨特的特徵是感染有新近發現的人類皰疹病毒-8 chuman herpersuirus-8,hhv-8，也稱為卡波肉瘤相關性皰疹病毒(kapo′s sarcoma-associated herpervirus)。此病也常同時感染eb病毒。已從患艾滋病相關性pel(aids-associated pel)和患非艾滋病相關性pel(non.aids associated pel)患者的腹水、胸水及外周血中建立起一系列的pel細胞系，因而為研究pel的發病機理等提供了體外模型。現將此類細胞系的生物學特點介紹如下：

1　臨床資料及培養條件

　　現已從9名男性pel患者的胸、腹水及外周血中建立起11株pel細胞系。令人吃驚的是到目前為止，已建立的240種人類腫瘤細胞系中，包括白血病細胞系，只有pel細胞系是hhv-8陽性。7例患者為aids相關性pel，2例為非aids相關性pel。年齡分佈31～94歲，4例患者確診pel前已患有卡波肉瘤。所有患者已確診pel後生存期非常短，考慮到大多數患者同時也處於艾滋病晚期，故漿膜腔的大量淋巴瘤細胞滲出並不被認為是此病的直接死亡原因。4例細胞系建立於胸水滲出物，2例於腹水滲出物，1例為非特異性滲出物和1例外周血。所有細胞系均可不需額外因子刺激，在常規胎牛血清培養液中呈單細胞懸液自發性生長。

2　形態學特徵

　　mory-giunwald-giemsa染色塗片，細胞呈高度異質性，大而圓，中等至豐富的胞漿，嗜鹼性強，核呈圓形成卵圓形，多有切跡或捲曲，可見1個或多個大而清晰的核仁，許多細胞似漿細胞樣，其它的呈典型的免疫母細胞樣或退行性變，也可見到大的多形性帶有不規則或小葉狀核的細胞，多數為雙葉核和多葉核巨大細胞，分裂核多見，提示倍增時間很短。

3　病毒學檢查

　　11株pel細胞系均為hhv-8陽性，採用半定量pcr分析及southern blot分析發現，pel細胞中含有相對高的hhv-8 dna複製數(每個細胞約含40～50個)，且在適當刺激下，hhv-8病毒立即被啟用而自我複製，有6株pel細胞系同時eb病毒陽性，其餘5株為陰性。說明eb病毒感染並非pel發病機制所必須的條件，且大多數eb病毒陽性的pel細胞僅表達有限的eb病毒抗原，兩個常見的eb病毒編碼的轉錄抗原為陽性，所有的pel細胞系均未檢出其它種類的皰疹病毒如cmv，hhv-6，hhv-7，hsv-1及hsv-2，以及反轉錄病毒hiv，fitlv-1，htlv-2。

4　免疫學標誌

　　當大多數細胞為cd⁺₄₅時，細胞主要表現為：cd^-₂，cd^-₃，cd^-₄，cd^-₅，cd^-₇，cd^-₈，cd^-₁₀，cd^-₁₉，cd^-₂₀，cd^-₂₁，cd^-₂₂，cd^-₄₀，cd^-₇₂，cd₇₉，a/b^-和smig^-，所有細胞係為cd⁺₃₈。提示細胞分化阻滯於前b細胞或漿細胞階段。某些細胞表達活化標誌如hla-dr，cd₂₃，cd₂₅，cd₃₀及cd₃₈，6株細胞表達上皮膜抗原，還有些細胞表達粘附抗原。

5　細胞基因學特徵

　　***pel細胞獲得了完整的基因圖譜，主要為：細胞含有多種克隆性染色體異常及複雜的高倍體核型。在瀰漫性大細胞性淋巴瘤，bur-killt肉瘤，帽狀淋巴瘤、濾泡樣淋巴瘤和alcl中，常見的基因異常如t(2.57) cp 23;q 35,t(3.14)(q 37,q 32),t(8,14)(q 24,q 32),t(11,14)(q 13,q 32)或t(14,18)(q 32,q 21)在pel細胞中都未檢測到。相反常可見到三倍體7，三倍體12和染色體(q²¹-q²⁵)易位。這些染色體異常所代表的基因位點目前仍然不清。

6　分子基因學特徵

　　採用southeh blot雜交分析揭示存在著免疫球蛋白重鏈及輕鏈重排。無常見原癌基因c-myc,bcl-1,bcl-2,bcl-6重排。腫瘤抑制基因p⁵³多為野生型，無點突變。有趣的是，8株pel細胞系中，7株出現bcl-65′非編碼端突變，其內在含義不清。

7　功能性特徵

　　a、異移植性：向scid鼠腹腔或皮下注射pel細胞(bcbl-1)可誘發腹水和大量和血管樣實體瘤，此現象同casetman′s病的血管源性反應類似。對nod/scid小鼠靜脈或腹內注入pel細胞(bcp-1或hol-6)可出現腹水及多臟器的淋巴瘤細胞滲出。若在某些小鼠皮下植入bcp-1細胞，產生實體淋瘤及血管樣增生，而對三聯免疫缺陷bnx鼠注入pel細胞(ks-1)，可誘發大量腹水。

8　病毒類功能蛋白

　　hhv-8是唯一能編碼一系列模擬細胞週期調節蛋白受體、訊號傳導蛋白的病毒，如它可產生一系列蛋白模擬白介素(il-6)，α/β巨噬細胞炎性蛋白-1(mip-1 α/β)，干擾素調節因子(irf)，白介素8受體(il-8r)，補體受體-2(cr₂/cd₂₁)粘附分子ncam cd₅₆，抗凋亡原癌基因bcl-2，細胞週期素d(cyclin d)的功能。病毒類il-6有62%的氨基酸與人類相同，儘管病毒il-6與人類il-6存在序列差異，它卻具有相同生物學特性。使鼠漿細胞瘤b9和人類骨髓瘤細胞系ina-6在缺乏il-6條件下耐受凋亡。病毒類il-8受體具有構成活性，決定磷酸肌醇通路的功能性訊號傳遞。pel細胞常高表達bcl-2基因，因而使早期感染病毒的細胞耐受凋亡。hhv-8的bcl-2與其它的細胞類或病毒類蛋白共同作用，可加強細胞內的訊號傳遞。hhv-8編碼細胞週期素d可使rb磷酸化，加速了細胞增殖過程。由於細胞抵抗病毒感染通常涉及細胞週期阻滯和細胞凋亡，hhv-8編碼的bcl-2，cyclin-d，il-6等一系列產物透過抑制上述過程致受病毒感染的細胞異常增殖直至瘤性擴張，已報道hhv-8亞基因片段可使nih₃t₃細胞瘤性轉化。當然，也許pel的發病過程亦需其它致病因素。

9　細胞因子的產生和對細胞因子的反應

　　某些pel細胞(bc-1，bc-2和ks-1細胞系)可產生高水平的人類il-6，il-10並表達il-6r，但不產生纖維母細胞生長因子(6fgf)，粒單克隆刺激因子(gm-csf)，il-1β，il-8，il-12或血小板生長因子(pdgf)。干擾素α及γ均可抑制pel細胞的克隆生成，而gm-csf，il-4，il-6，il-10卻對它無影響。人類il-6抗血清寡核苷酸可拮抗il-6的產生及克隆的形成，tpa可抑制構成性il-6產生。

(1999-01-26 收稿)